淺析LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 轉染試劑 P09310 轉染步驟

　　LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 轉染試劑 P09310 綜合了低的細胞毒性和高的轉染效率，讓更多細胞存活，且帶來生理上更相關的結果。而且，轉染步驟也相當簡單：只需用無血清培養基稀釋轉染試劑，與質粒共同孵育，然后逐滴加入細胞中。研究人員所需的優化少，當然，在轉染之前，你還是得優化轉染試劑與DNA的比例。建議的比例是3:1，但對于特定研究，2:1至7:1的比例可能會提高轉染效率。
 

　　LeapWal PolyShooter NEO-PEI DNA 轉染試劑 P09310 步驟：
 

　　1.轉染前一天，胰酶消化細胞并計數，細胞鋪板，使其在轉染日密度為90-95%。細胞鋪板在2ml含血清，不含抗生素的正常生長的培養基中。
 

　　2.對于每孔細胞，使用250ul無血清培養基(如OPTI-MEMI培養基)稀釋4.0ugDNA，輕輕混勻。
 

　　3.使用前將Lipofectamine2000轉染試劑輕輕混勻，用250ul無血清培養基(如OPTI-MEMI培養基)稀釋10ulLipofectamine2000轉染試劑，輕輕混勻。Lipofectamine2000稀釋后，在5分鐘內同稀釋的DNA混合(<30分鐘)。NOTE：若使用DMEM培養基，則需在5分鐘內同稀釋的DNA混合。
 

　　4.混合稀釋的DNA(第二步)和稀釋的Lipofectamine2000(第三步)。室溫放置20分鐘。
 

　　5.(optional)將6孔板中的舊營養液吸出，用無血清培養基清洗兩次。加入2ml無血清配養基。
 

　　6.直接將復合物加入到每孔中，搖動培養板，輕輕混勻。
 

　　7.在37℃，5%CO2中保溫24-48小時。無需去掉復合物或更換培養基?；蛘咴?-5小時后更換培養生長基也不會降低轉染活性。
 

　　8.在細胞中加入復合物24-72小時后，分析細胞抽提物或進行原位細胞染色，檢測報告基因活性。這依賴于細胞類型和啟動子活性。對穩定表達，在開始轉染一天后將細胞傳代至新鮮培養基中，兩天后加入篩選抗生素。進行穩定表達需要數天或數周。